Изоляция возбудителя бурой бактериальной гнили влагалища листа злаковых культур Pseudomonas fuscovaginae из семян

Бурая бактериальная гниль влагалища листа злаковых культур – бактериальное заболевание, которому подвержены посевы пшеницы, риса, кукурузы и сорго практически во всех регионах, где их выращивают. Возбудителем является бактерия вида Pseudomonas fuscovaginae (ex Tanii, Miyajima and Akita, 1976) Miyajima, Tanii and Akita (1983), имеющая карантинный статус для ряда стран, которые импортируют пшеницу из России. Для того чтобы улучшить процесс диагностики бактерии Pseudomonas fuscovaginae в фитосанитарных лабораториях, требуется разработка метода изоляции культуры из семян пшеницы. В исследовании растительные экстракты пшеницы, полученные в результате пробоподготовки, инокулировали суспензиями P. fuscovaginae в различных концентрациях и высевали на питательную среду R2A. Колонии P. fuscovaginae, выросшие на чашках со средой R2A, тестировали методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ), чтобы установить зависимость порогового цикла от концентрации бактерии в пробе. Установлено, что изоляция P. fuscovaginae возможна в случае содержания в пробе бактерии в концентрации 1 * 10⁴ КОЕ/мл и выше, что соответствует пороговому циклу флуоресценции (Ct) 32,0 на амплификаторе «ДТпрайм 5М6» (ООО «ДНК-Технология», Россия) и (Ct) 31,5 на амплификаторе CFX (Bio-Rad, США) при использовании набора «Pseudomonas fuscovaginae-РВ» (ООО «Синтол», Россия). Посев следует выполнять истощающим способом на среду R2A, используя 20 мкл концентрированной вытяжки семян, и осуществлять поиск колоний P. fuscovaginae спустя 3–7 суток после посева. Эта методика рекомендована для проведения исследований в лабораториях в области фитосанитарии и карантина растений.

1. Лавренчук Л.С., Ермошин А.А. Микробиология: практикум. Екатеринбург.: Урал, 2019, 107 с.

2. Мувинги М., Словарева О.Ю., Заргар М. Идентификация Pseudomonas fuscovaginae, Pseudomonas syringae и Xanthomonas translucens в зерне пшеницы методом ПЦР // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Агрономия и животноводство. 2022. Т. 17. № 4. C. 473–483.

3. Федоренко Т.В., Землянская Н.И. Санитарная микробиология. Часть 1. Благовещенск: Дальневосточный ГАУ, 2015, 52 с.

4. Федеральная государственная информационная система (ФГИС) «Аргус-Фито» [Электронный ресурс]. URL: https://fsvps.gov.ru/ru/fsvps/foremployees/argusfito/index.html (дата обращения: 27.07.2023).

5. Cottyn B. Bacteria associated with rice seed from Philippine farmers’ fields [PhD Thesis]. Los Baños: International Rice Research Institute (IRRI), 2003.

6. González D., Corzo-Lopez M., Márquez O.P., Cruz A., Martínez B., Martínez Y. Characterization and diagnosis of Pseudomonas fuscovaginae Miyajima, Tanii and Akita, causal agent of the Brown Sheath Rot in rice. Biotecnología Aplicada. 2017. Vol. 34. P. 2101–2108.

7. Jaunet T., Notteghem J., Rapilly F. Pathogenicity process of Pseudomonasfuscovaginae, the causal agent of sheath brown rot of rice. J Phytopathol. 199. Vol. 144 (9–10). P. 425–430.

8. Patel H.K., da Silva D.P., Devescovi G., Maraite H., Paszkiewicz K., Studholme D.J., Venturi V. Draft genome sequence of Pseudomonasfuscovaginae, a broadhost-range pathogen of plants // J. Bacteriol. No. 194. 2012. P. 2765–2766.

9. Razak A.A., Zainudin N.A.I.M., Sidiqe S.N.M., Ismail N.A., Mohamad N.M.I.N., Salleh B. Sheath brown rot disease of rice caused by Pseudomonas fuscovaginae in the Peninsular Malaysia. J. Plant Protect Res. 2009. Vol. 49 (3). P. 244–249.

10. Rott P., Honegger J., Notteghem J. Isolation of Pseudomonasfuscovaginae with a semiselective medium (KBS). Int Rice Res Newslett. 1989. Vol. 14 (1). P. 29.

11. Tambong J. Bacterial Pathogens of Wheat: Symptoms, Distribution, Identification, and Taxonomy. In (Ed.), Wheat [Working Title]. 2022. 25 p.