Сравнение методов выделения ДНК вирусных инфекций из табачной белокрылки Bemisia tabaci (Genn.) на примере вируса желтой курчавости листьев томата (TYLCV)

Табачная белокрылка (Bemisia tabaci Genn.) – один из ключевых переносчиков фитопатогенных вирусов, прежде всего бегомовирусов (сем. Geminiviridae), к которым и относится вирус желтой курчавости листьев томата (TYLCV).
В связи с тем, что TYLCV имеет фитосанитарный статус и регулируется в соответствии с Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 30 ноября 2016 г. № 158, особенно важно обеспечить его раннее выявление и идентификацию. В рамках настоящего исследования было принято решение определить возможность выделения ДНК TYLCV из особей табачной белокрылки, хранящихся разными способами – в 70%-м растворе этилового спирта и в замороженном состоянии. Питание данных особей происходило на растениях томата, зараженных TYLCV. Сравнивали выделение ДНК разными коммерческими наборами, после чего проводили измерение концентрации ДНК. Затем осуществляли постановку ПЦР в режиме реального времени.
Дополнительно с целью анализа генетической последовательности участка гена цитохромоксидазы B. tabaci после выделения тотальной НК ставили классическую ПЦР к искомому фрагменту. Как показало исследование, ДНК-продукт был детектирован при обоих способах выделения, указанные методы применимы на практике. Так как в случае с образцами табачной белокрылки, хранящимися в 70%-м растворе этанола, наблюдали ингибирование реакции при выделении набором «Проба-НК», к использованию рекомендуется набор «ФитоСорб».

1. Лозовая Е.Н., Приходько Ю.Н., Живаева Т.С., Шнейдер Ю.А. Диагностика вирусов рода Begomovirus. Фитосанитария. Карантин растений. 2023; (1): 23–31. https://doi.org/10.69536/v0718-2972-0994-b

2. МР ВНИИКР 39-2015. Методические рекомендации по выявлению и идентификации бегомовируса желтой курчавости листьев томата Tomato yellow leaf curl begomovirus ФГБУ «ВНИИКР», 2015, 99 с.

3. De Barro, P.J.; Liu, S.-S.; Boykin, L.M.; Dinsdale, A.B. Bemisia tabaci: A statement of species status. Annu. Rev. Entomol. 2011, 56, 1–19.

4. Ghanim, M. A review of the mechanisms and components that determine the transmission efficiency of tomato yellow leaf curl virus (Geminiviridae; Begomovirus) by its whitefly vector. Virus Res. 2014, 186, 47–54.

5. Fiallo-Olivé, E.; Pan, L.L.; Liu, S.S.; NavasCastillo, J. Transmission of begomoviruses and other whitefly-borne viruses: Dependence on the vector species. Phytopathology 2020, 110, 10–17.

6. Hogenhout, S.A.; Ammar, E.-D.; Whitfield, A.E.; Redinbaugh, M.G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annu. Rev. Phytopathol. 2008, 46, 327–359.

7. Power, A.G. Insect transmission of plant viruses: A constraint on virus variability. Curr. Opin. Plant. Biol. 2000, 3, 336–340.

8. Rosen, R.; Kanakala, S.; Kliot, A.; Cathrin Pakkianathan, B.; Farich, B.A.; Santana-Magal, N.; Elimelech, M.; Kontsedalov, S.; Lebedev, G.; Cilia, M.; et al. Persistent, circulative transmission of begomoviruses by whitefly vectors. Curr. Opin. Virol. 2015, 15, 1–8.

9. Whitfield, A.E.; Falk, B.W.; Rotenberg, D. Insect vector-mediated transmission of plant viruses. Virology 2015, 479, 278–289.