phytosanitaryФитосанитария. Карантин растенийPlant Health and Quarantine2782-327X10.69536/f2846-6190-5909-jphytosanitary-130Research ArticleДИАГНОСТИКАDIAGNOSTICSДиагностика стеблевой нематоды картофеля Ditylenchus destructor в фитосанитарной практикеDiagnosis of potato root nematode Ditylenchus destructor in phytosanitary practiceСудариковаС, В.SudarikovaS. V.

Сударикова Стелла Валериевна, старший научный сотрудник лаборатории гельминтологии ИЛЦ

 р. п. Быково, г. Раменское, Московская обл., 140150 

Stella V. Sudarikova, Senior Researcher, Helminthology Laboratory of Testing Laboratory Center

Bykovo, Ramenskoye, Moscow Oblast, 140150 

sudarikovah@mail.ruХудяковаЕ. А.KhudyakovaE. A.

Худякова Елена Анатольевна, старший научный сотрудник лаборатории гельминтологии ИЛЦ

р. п. Быково, г. Раменское, Московская обл., 140150 

Elena A. Khudyakova, Senior Researcher, Helminthology Laboratory of Testing Laboratory Center

Bykovo, Ramenskoye, Moscow Oblast, 140150 

fer59@mail.ruЛиманцеваЛ. А.LimantsevaL. A.

Лиманцева Людмила Алексеевна, старший научный сотрудник

Москва, 119071

LyudmilaA.  Limantseva, Senior Researcher

Moscow, 119071

lutik47@yandex.ruФГБУ «Всероссийский центр карантина растений» (ФГБУ «ВНИИКР»)РоссияFGBU “All-Russian Plant Quarantine Center” (FGBU “VNIIKR”)Russian FederationЦентр паразитологии Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова Российской академии наук (ИПЭЭ РАН)РоссияCenter of Parasitology of the A.N. Severtsov Institute of Ecology and Evolution of the Russian Academy of Sciences (IEE RAS)Russian Federation202318052023023439Copyright © Сударикова С.В., Худякова Е.А., Лиманцева Л.А., 20232023Сударикова С.В., Худякова Е.А., Лиманцева Л.А.Sudarikova S.V., Khudyakova E.A., Limantseva L.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://phytosanitary.vniikr.ru/jour/article/view/130

Среди более чем 90 видов нематод рода Ditylenchus стеблевая нематода лука Ditylenchus dipsaci (Kühn, 1857) Filipjev, 1936 и стеблевая нематода картофеля Ditylenchus destructor Thorne, 1945 имеют важное экономическое значение для сельскохозяйственных культур. Эти нематоды являются мигрирующими эндопаразитами и полифагами. Наиболее распространен и вредоносен для культуры картофеля на территории нашей страны вид D. de­ structor, который имеет карантинный статус для ряда стран – импортеров российской продукции. Поэтому быстрая и точная его диагностика имеет большое значение для фитосанитарной практики. В международных и региональных диагностических протоколах основное внимание уделяется стеблевой нематоде лука D. dipsaci, а для идентификации D. destructor представлены достаточно трудоемкие для лабораторий тесты. С целью оптимизации диагностики стеблевой нематоды картофеля D. destructor был выбран метод классической полимеразной цепной реакции, предложенный польскими учеными – Arnika Jeszke с соавторами (Jeszke et al., 2013), с универсальным и видоспецифическим праймерами DITuniF/DITdesR, разработанными к участку внутреннего транскрибируемого спейсера 1 (ITS1) и 5.8S рДНК. Тест был апробирован с отечественными коммерческими наборами для выделения ДНК и амплификации, также оптимизирован состав рабочей смеси для получения лучшего результата при работе с этими наборами. В процессе апробации протестированы отечественные картофельные популяции D. destruc­ tor различного географического происхождения, установлена их принадлежность к гаплотипу Е. Успешно проведена оценка применимости теста. Он рекомендован для проведения исследований в  отечественных  диагностических  лабораториях в области фитосанитарии и карантина растений.

Among over 90 nematode species of the genus Ditylen­ chus, Ditylenchus dipsaci (Kühn, 1857) Filipjev, 1936 and Ditylenchus destructor Thorne, 1945 are of great economic importance for agricultural crops. These nematodes are migratory endoparasites and polyphages. The species D. destructor is most common and harmful for potato culture in Russia, which has a quarantine status for some countries importing Russian products. Therefore, its rapid and accurate diagnosis is of great importance for phytosanitary practice. International and regional diagnostic protocols focus on D. dipsaci, and for the identification of D. destructor, quite sophisticated tests for laboratories are presented. In order to optimize the diagnosis of D. destructor, the classical polymerase chain reaction method was chosen, proposed by Polish scientists – Arnika Jeszke with co-authors (Jeszke et al., 2013), with universal  and  species-specific DITuniF/DITdesR primers designed for the region of internal transcribed spacer 1 (ITS1) and 5.8S rDNA. The test was verified with Russian commercial kits for DNA extraction and amplification, and the composition of the working mixture was also optimized to obtain the best result when working with these kits. In the verification process, Russian potato populations of D. de­ structor of various geographic origins were tested, and their belonging to the E haplotype was established. The applicability of the test was assessed successfully. It is recommended for research in Russian diagnostic laboratories for phytosanitary and plant quarantine.

Фитосанитариямолекулярно-генетические методыПЦРПДРФITSгаплотипPhytosanitarymolecular genetic methodsPCRRFLPITShaplotypeReferencesЕфременко В.П., Бурштейн Х.С. Стеблевая нематода картофеля и меры борьбы с нею в Литовской ССР // В сб.: Нематодные болезни сельскохозяйственных культур и меры борьбы с ними. 1972. С. 97–98.Efremenko V.P., Burshtein Kh.S. Potato stem nematode and control measures in the Lithuanian SSR [Steblevaya nematoda kartofelya i mery borby s neyu v Litovskoy SSR] // In: Nematode diseases of agricultural crops and control measures. 1972; 97–98. (In Russ.)Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков / Анисимов Б.В., Белов Г.Л., Варицев Ю.А., Еланский С.Н., Журомский Г.К., Завриев С.К., Зейрук В.Н., Иванюк В.Г., Кузнецова М.А., Пляхневич М.П., Пшеченков К.А., Симаков Е.А., Склярова Н.П., Сташевски З., Усков А.И., Яшина И.М. // Картофелевод. 2009. 272 с.Protection of potatoes from diseases, pests and weeds [Zashchita kartofelya ot bolezney, vrediteley i sornyakov ] / Anisimov B.V., Belov G.L., Varitsev Yu.A., Elansky S.N., Zhuromsky G.K., Zavriev S.K., Zeiruk V.N., Ivanyuk V.G., Kuznetsova M.A., Plyakhnevich M.P., Pshechenkov K.A., Simakov E.A., Sklyarova N.P., Stashevsky Z., Uskov A.I., Yashina THEM. // Potato grower. 2009; 272. (In Russ.)МСФМ 27 ДП 8: Ditylenchus dipsaci и Ditylenchus destructor (2015).ISPM 27 DP 8: Ditylenchus dipsaci and Ditylenchus destructor (2015).Прикладная нематология / Буторина Н.Н., Зиновьева С.В., Кулинич О.А. и др.; [отв. ред. Зиновьева С.В., Чижов В.Н.]; Ин-т паразитологии РАН. – М.; Наука, 2006. 350 с.: – ISBN 5-02-034307-2 (в пер.).Applied nematology / Butorina N.N., Zinovieva S.V., Kulinich O.A. and etc.; [res. ed. Zinovieva S.V., Chizhov V.N.]; Institute of Parasitology RAS. – M.; Nauka, 2006. 350 p.: – ISBN 5-02-034307-2 (in transl.). (In Russ.)Фитопаразитические нематоды России / Зиновьева С.В., Чижов В.Н., Приданников М.В., Субботин С.А., Рысс А.Ю., Хусаинов Р.В. // Товарищество научных изданий КМК. 2012. С. 242–248.Phytoparasitic nematodes of Russia [Fitoparaziticheskiye nematody Rossii] / Zinovieva S.V., Chizhov V.N., Pridannikov M.V., Subbotin S.A., Ryss A.Yu., Khusainov R.V. // Association of scientific publications KMK. 2012; 242–248. (In Russ.)A comparative and phylogenetic study of the Ditylenchus dipsaci, Ditylenchus destructor and Ditylenchus gigas populations occurring in Poland (Short Communication) / Jeszke A., Budziszewska M., Dobosz R., Stachowiak A., Protasewicz D., Wieczorek P. & Obrępalska-Stęplowska A. // Journal of Phytopathology. 2013. 162: 61–67.A comparative and phylogenetic study of the Ditylenchus dipsaci, Ditylenchus destructor and Ditylenchus gigas populations occurring in Poland (Short Communication) / Jeszke A., Budziszewska M., Dobosz R., Stachowiak A., Protasewicz D., Wieczorek P. & Obrępalska-Stęplowska A. // Journal of Phytopathology. 2013. 162: 61–67.Molecular diagnostics, taxonomy and phylogeny of the stem nematode Ditylenchus dipsaci species complex based on the sequences of the ITS-rDNA / Subbotin S.A., Madani M., Krall E., Sturhan D. & Moens M. // Phytopathology. 2005. 95: 1308–1315.Molecular diagnostics, taxonomy and phylogeny of the stem nematode Ditylenchus dipsaci species complex based on the sequences of the ITS-rDNA / Subbotin S.A., Madani M., Krall E., Sturhan D. & Moens M. // Phytopathology. 2005. 95: 1308–1315.Molecular identification of Ditylenchus destructor nematode with PCR Species-Specific primers in the Moscow region / Mahmoudi N., Naserzadeh Y., Pakina E.N., Limantceva L.A., Nejad D.K. // RUDN Journal of Agronomy and Animal Industries. 2019. 14 (4): 430–436.Molecular identification of Ditylenchus destructor nematode with PCR Species-Specific primers in the Moscow region / Mahmoudi N., Naserzadeh Y., Pakina E.N., Limantceva L.A., Nejad D.K. // RUDN Journal of Agronomy and Animal Industries. 2019. 14 (4): 430–436.PM 7/87 (2) Ditylenchus destructor and Ditylenchus dipsaci (2017) // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 2017. 47 (3), 401–419.PM 7/87 (2) Ditylenchus destructor and Ditylenchus dipsaci (2017) // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 2017. 47 (3), 401–419.Wendt K.R., Vrain T.C. & Webster J.M. Separation of three species of Ditylenchus and some host races of D. dipsaci by restriction fragment length polymorphism // Journal of Nematology. 1993. 25: 555–563.Wendt K.R., Vrain T.C. & Webster J.M. Separation of three species of Ditylenchus and some host races of D. dipsaci by restriction fragment length polymorphism // Journal of Nematology. 1993. 25: 555–563.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.